珍藏版 史上最全的基因编辑常用技术指南(4)

具体原理如下：
图中的白色箭头对应的是LoxP位点，黑色箭头对应的是Lox-2722位点。这两种位点都能被CRE所识别，并在相同位点间发生重组，而不同位点之间不能发生重组。
发生重组时，方向相反的两个位点之间的序列会被颠倒，而方向相同的两个位点之间的序列被切除。
在图中，假设第一次重组发生在LoxP位点之间，原本反向插入在启动子后的目的基因（不表达），重组后变成顺式结构，能够被启动子驱动表达。第二次的重组发生在两个Lox-2722位点之间，它们的重组导致了中间的LoxP位点丢失，同时只保留下一个Lox-2722位点。最后剩下的Lox-2722和LoxP位点之间不能发生重组，所以整个基因结构便被固定下来。
在这个基础上，也就产生了DO（Cre-off）、DIO（Cre-on）和Cre-Switch（Cre-off/on）。这三种系统中，LoxP序列在同一条载体上，并且方向相同， 只是外源基因的插入方向不同。
◉ DO系统（Cre-off）：插入基因与启动子方向一致，在Cre重组酶存在的情况下会发生重组导致基因方向反向，因此基因不表达，所以称之为Cre-Off；
◉ DIO系统（Cre-on）：插入基因方向与启动子方向相反，在Cre重组酶不存在的情况下不表达，只有当Cre酶存在时，发生重组使基因方向与启动子方向一致，才能使该基因表达，因此该系统称之为Cre-On；

◉ FLEX系统（Cre-on）：FLEX系统与DIO系统一致，只是LoxP位点方向与DIO系统不同。插入基因方向与启动子方向相反，在Cre重组酶不存在的情况下不表达，只有当Cre酶存在时，发生重组使基因方向与启动子方向一致，才能使该基因表达；