珍藏版 史上最全的基因编辑常用技术指南(6)

CRISPR/Cas9系统有两个不同的组成部分：指导RNA（gRNA）和核酸内切酶，在上图中为Cas9。当在细胞中表达时，gRNA/Cas9复合物通过gRNA之间的碱基配对募集到靶序列及其在基因组DNA中的互补序列。为了使Cas9成功结合到DNA，基因组DNA中的靶序列不仅必须与gRNA序列互补，而且必须紧随其后的是正确的PAM（protospacer adjacent motif）序列。请注意，PAM序列存在于DNA靶序列中，但不存在于gRNA序列中，任何具有正确靶序列且后接PAM序列的DNA序列都将被Cas9结合。不同的cas9蛋白识别的PAM序列不同。

CRISPR/Cas9技术的应用
1. 导致双链断裂：完整功能的CRISPR/Cas酶将根据gRNA序列在特定位置引入双链断裂（DSB）。DSBs优先通过非同源末端连接（NHEJ）在细胞中修复，该机制经常会导致DNA中引物插入或缺失（indels），插入缺失会导致移码功能等位基因缺失。